圓二色光譜對卵清蛋白二級結構的影響
圓二色光譜對卵清蛋白二級結構的影響
圓二色光譜用于推斷非對稱分子的構型和構象的一種旋光光譜。光學活性物質對組成平面偏振光的左旋和右旋圓偏振光的吸收系數(ε)是不相等的，εL≠εR，即具有圓二色性。如果以不同波長的平面偏振光的波長λ為橫坐標，以吸收系數之差Δε=εL-εR為縱坐標作圖，得到的圖譜即是圓二色光譜，簡稱CD。如果某手性化合物在紫外可見區域有吸收，就可以得到具有特征的圓二色光譜。由于εL≠εR，透射光不再是平面偏振光，而是橢圓偏振光，摩爾橢圓度[θ]與Δε的關系為：[θ]=3300Δε。圓二色譜也可以摩爾橢圓度為縱坐標，以波長為橫坐標作圖。由于△ε有正值和負值之分，所以圓二色譜也有呈峰的正性圓二色譜和呈谷的負性圓二色譜。在紫外可見光區域測定圓二色譜與旋光譜，其目的是推斷有機化合物的構型和構象。
圓二色光譜(簡稱CD)是目前應用最為廣泛的測定蛋白質二級結構的方法，是研究稀溶液中蛋白質構象的一種快速、簡單、較準確的方法。它可以在溶液狀態下測定，較接近其生理狀態。而且測定方法快速簡便，對構象變化靈敏，所以它是目前研究蛋白質二級結構的主要手段之一，并已廣泛應用于蛋白質的構象研究中186]。蛋白質是由氨基酸通過膚鍵連接而成的具有特定結構的生物大分子。在蛋白質中，氨基酸的a一碳原子是不對稱碳原子，具有光學活性，蛋白質的膚鏈走向也是不對稱的結構，也具有光學活性，當平面圓偏振光通過這些光活性的生色基團時，光活性中心對平面圓偏振光中的左、右圓偏振光的吸收不相同，產生了吸收差值，由于這種吸收差的存在，造成了偏振光矢量的振幅差，圓偏振光變成了橢圓偏振光，這就是蛋白質的圓二色性。通過測定蛋白質溶液的圓二色性，可以研究蛋白質的二級結構及其變化信息[87一l。一般蛋白質的圓二色光譜分為兩段，波長范圍在185一245Inn稱為遠紫外區，245一320nln稱近紫外區。具有不同二級結構的蛋白質或多膚所產生的CD譜帶的位置、吸收的強弱都不相同。a一螺旋結構在靠近192Inn有一正的譜帶，在222和208nm處表現出兩個負的特征肩峰譜帶;p一折疊的CD譜在216nm有一負譜帶，在185一Zoonln有一正譜帶;p一轉角在206lun附近有一正CD譜帶。遠紫外區是蛋白質膚鏈的吸收峰，反映了主鏈的構象。因此，可利用這一區域的CD光譜推算蛋白質分子中的a一螺旋、p一折疊、p一轉角以及無規卷曲的含量191]。本實驗利用圓二色光譜分析經動態超高壓微射流均質處理后的卵清蛋白的二級結構變化情況。
